在細胞培養(yǎng)及相關(guān)衍生實驗中,顯微鏡是一個很重要的儀器。目前,市場上有各種類型的顯微鏡,選擇一款符合需求又適用的顯微鏡是一個挑戰(zhàn),下面為大家介紹倒置顯微鏡和熒光顯微鏡的原理,便于大家選擇。
倒置顯微鏡
倒置顯微鏡組成和普通顯微鏡一樣,主要包括三部分:機械部分、照明部分、光學部分。
倒置顯微鏡組成和普通正置顯微鏡一樣,只不過物鏡與照明系統(tǒng)顛倒,前者在載物臺之下,后者在載物臺之上。
這樣的構(gòu)造使得照明聚光系統(tǒng)與載物臺的有效距離可以顯著擴大,便于放置培養(yǎng)皿、細胞培養(yǎng)瓶等較厚的待觀察器具(當然載玻片等也可以),而同時物鏡與材料之間的工作距離不必很大。
倒置顯微鏡供醫(yī)療衛(wèi)生單位、高等院校、研究所用于微生物、細胞、細菌、組織培養(yǎng)、懸浮體、沉淀物等的觀察,可連續(xù)觀察細胞、細菌等在培養(yǎng)液中繁殖分裂的過程,并可將此過程中的任一形態(tài)拍攝下來。
在細胞學、寄生蟲學、腫瘤學、免疫學、遺傳工程學、工業(yè)微生物學、植物學等領(lǐng)域中應(yīng)用廣泛。
倒置顯微鏡
熒光顯微鏡
熒光顯微鏡用于研究細胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運輸、化學物質(zhì)的分布及定位等。
對被檢物體來說,熒光產(chǎn)生方式有兩種:自發(fā)熒光,經(jīng)過紫外照射直接發(fā)出熒光;繼發(fā)熒光,被觀察物體經(jīng)過熒光染料處理之后,經(jīng)過紫外光照射才能發(fā)出熒光。
細胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,受紫外線照射后產(chǎn)生自發(fā)熒光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)出繼發(fā)熒光。
熒光顯微鏡利用一個高發(fā)光效率的點光源,經(jīng)過濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長的光(紫外光365nm或紫藍光420nm)作為激發(fā)光、激發(fā)標本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各種不同顏色的熒光后,再通過物鏡和目鏡的放大進行觀察。
這樣在強烈的對襯背景下,即使熒光很微弱也易辨認,敏感性高,主要用于細胞結(jié)構(gòu)和功能以及化學成分等的研究。
研究級熒光顯微鏡
熒光顯微鏡分為透射式和落射式兩類,前者較為原始,后者較為先進。
兩類熒光顯微鏡的基本構(gòu)建相似,主要區(qū)別為:透射式的激發(fā)光透過標本,標本整體產(chǎn)生熒光,熒光再進入物鏡,放大倍數(shù)越高,熒光越弱;落射式的激發(fā)光投射在標本表面,標本表面產(chǎn)生熒光,熒光再進入物鏡,放大倍數(shù)越高,熒光越強,適于進行高倍觀察。
熒光顯微鏡主要構(gòu)件有汞燈光源、激發(fā)濾板、分色鏡(落射式)、壓制濾板、暗場聚光鏡(透射式)等。此外,由于汞燈發(fā)熱嚴重,大多還裝有吸熱濾鏡。
部分熒光顯微鏡還有相差物鏡和環(huán)狀光闌,因此可以進行相差觀察。
還有的熒光顯微鏡采取倒置構(gòu)架,又是倒置顯微鏡,等等。
倒置熒光顯微鏡
此外,上述顯微鏡都可以通過安裝CCD組裝成數(shù)碼顯微鏡,它是將顯微鏡看到的實物圖像通過數(shù)模轉(zhuǎn)換,使其成像在計算機上。
從而,我們可以對微觀領(lǐng)域的研究從傳統(tǒng)的普通的雙眼觀察到通過顯示器上再現(xiàn),從而提高了工作效率。